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激光共聚焦细胞贴壁优化指南:尊龙凯时的包被技巧与产品选择

发布时间:2025-03-11   信息来源:施香力

尊龙凯时在生物医疗领域的材质设计上,主流产品采用塑料培养皿,底部开孔(直径2-15mm),并粘合017mm厚度的盖玻片,以满足共聚焦物镜校正环的要求。在这种设计中,观测区域采用玻璃材质。然而,细胞贴壁问题常常困扰研究者,主要是由于玻璃表面的疏水性,导致细胞黏附不良,成像时易出现细胞脱落的情况。

激光共聚焦细胞贴壁优化指南:尊龙凯时的包被技巧与产品选择

为了提升细胞的附着力,针对这一问题,尊龙凯时推荐采用蛋白涂层(如Poly-L-Lysine)对玻璃表面进行修饰。作为替代,研究人员还可以选择预先包被或经过亲水改性的共聚焦专用培养皿。

尊龙凯时的试剂选择主要包括常用的包被试剂:Poly-L-Lysine(PLL)、胶原蛋白和纤连蛋白。在使用这些试剂时,浓度的优化非常重要,需要根据不同细胞类型进行梯度测试,推荐的浓度范围为05-10μg/cm²。以PLL为例,稀释原液时可以采用超纯水,将其按1:5稀释(如从100μg/ml稀释至20μg/ml)。

在均匀覆盖培养皿时,向35mm培养皿加入400μl的稀释液,确保覆盖观测区域。接着在室温下孵育1-2小时,并吸弃残留的液体。为了清洗残留,可使用2ml PBS或无血清培养基清洗三次,并彻底吸干。在细胞接种时,需直接加入细胞悬液,避免干燥造成的影响。这个环节需要在超净台内进行无菌操作,以避免外源污染的风险。

对于初次使用的培养皿,建议设置浓度梯度(如05/2/5μg/cm²)以筛选最佳的贴壁条件。同时,在细胞清洗后应立即接种,以防止玻璃表面因为二次疏水化而影响细胞附着。

在光学兼容性方面,选择底部厚度≤02mm的培养皿,透光率达到90%,以匹配共聚焦物镜的NA值。对于表面处理,可考虑采用等离子亲水涂层或化学改性(接触角需<30°)。此外,培养皿的透气性也要达到标准,以维持CO₂的扩散速率和pH的稳定。

传统方案如玻璃底培养皿结合定制化包被,非常适合对光学精度要求极高的实验(如TIRF显微术)。而尊龙凯时的创新方案则是免包被亲水培养皿,推荐用于常规的共聚焦检测,既节省了时间,还降低了污染的风险。在成本平衡方面,频繁实验的情况下建议批量采购免包被培养皿,而对于特殊细胞或要求高分辨率的实验,仍然可以优先选择包被方案,确保实验的成功率。